DNA는 물에 잘 녹기 때문에 에탄올을 넣어주지 않으면 column에 붙어있던 DNA가 다 녹아버릴 수 있다.
컬럼튜브 속에 있는 실리카 층에 DNA가 붙는 원리
DNA를 버퍼에 녹인 후 스핀칼럼에 넣고 원심분리기를 돌리면 칼럼 아래의 실리카 층에 DNA가 붙게 된다. 그 이유는 높은 농도의 chaotropic salt (수소이온결합 억제 물질)에 DNA가 녹아 있는데 이것이 높은 이온강도로 실리카 표면의 음전하를 감소시키고 이에 따라 정전기 반발이 감소한다. 따라서 음성의 인산기와 음성의 silica가 표면에 흡착된다.
원심분리기
원심 분리기는 원심력을 사용하여 유체의 다양한 구성 요소를 분리하는 장치이다. 이는 용기 내에서 유체를 고속으로 회전시켜 밀도가 다른 유체 또는 액체를 고체에서 분리시킨다. 밀도가 높은 물질과 입자가 반경 방향인 바깥쪽으로 이동하고, 동시에 밀도가 낮은 물체는 이동되어 중심으로 이동한다. 샘플 튜브를 사용하는 실험실 원심 분리기에서 방사형 가속으로 인해 밀도가 높은 입자는 튜브의 바닥에 가라앉고 밀도가 낮은 물질은 위쪽으로 올라간다. 원심 분리기는 유체 본체에서 오염 물질을 분리하는 매우 효과적인 필터이다.
산업용 규모의 원심분리기는 부유 고체를 침전시키거나 혼합되지 않는 액체를 분리하기 위해 제조 및 폐기물 처리에 일반적으로 사용된다. 매우 높은 가속도를 제공할 수 있는 초고속 원심분리기와 초원심분리기는 미세 입자를 나노 단위까지 분리할 수 있고 다른 질량의 분자도 분리할 수 있다. 대형 원심 분리기는 높은 중력 또는 가속 환경을 시뮬레이션하는 데 사용되고(예: 테스트 파일럿을 위한 높은 G 교육), 중간 크기의 원심 분리기는 세탁기와 일부 수영장에서 직물에서 물을 빼는 데 사용된다. 가스 원심분리기는 핵분열성 동위원소를 위한 핵연료 농축과 같은 동위원소 분리에 사용된다.
원심분리 후 층 분리
(실험 과정 중) 8번
튜브(위층): 에탄올, DNA / 회수관(아래층): 물, Proteinase K, 혈액
9번
튜브(위층): 에탄올, DNA / 회수관(아래층): washing buffer 1 (WA1), 히스톤 단백질, 세포막
10번
튜브(위층): 에탄올, DNA / 회수관(아래층): washing buffer 2 (WA2), 히스톤 단백질, 세포막
11번
튜브(위층): DNA / 회수관(아래층): 에탄올
13번
튜브(위층): DNA 회수관(아래층): EA buffer
마지막에 하층액을 남기는 이유는 하층액을 다시 DNA 샘플에 섞어서 반복 희석작업을 거쳐 DNA 수율을 높이기 위함이다.
6. 참고문헌
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https://youtu.be/gmNw6CWtN5k
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AccuPrep_Genomic_DNA_Extraction_Kit(키트 매뉴얼)
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