임상미생물학및실험
REPORT
미생물 보고서
MacConkey agar, Tsl 시험, API Kit, E- test(vancomtcin)
레포트월드
실험에서 쓰인 균종
Enterobacter aerogenes
Proteus vulgaris
Escherichia coli
Salmonella typhymurium
Klebsiella pneumonia
1. MacConkey agar
1) 실험원리
MacConkey배지는 장내 세균과를 구분할 때 편한 배지이다. 주로 병원성과 비병원성을 구분할 때 쓴다.
그람 음성균 선택배지이지만 영양강화배지는 아니다.
배지 속에는Crystal violet과 bile salt, Lactose를 함유 하고있다(그람 양성균 성장 억제)
Lac +일 경우 산을 생성하여 핑크색 콜로니를 형성하고 lac -일때는 아무런 변화가 없다.
2) 실험과정
준비된 알수 없는 세균 3,6,7,8,9을 MacConkey 배지에 백금이 법을 이용하여 옮기고
37도의 온도에서 하루 동안 보관하고 관찰한다.
3) 결과
(앞에서부터 3,6,7,8,9)
핑크색 집락이 생성된 3,7,8은 lac+반응을 일으킨 것으로 보이고
아무런 변화가없는 6,9 번은 lac- 반응이 일어난 것으로 보인다
따라서 양성 반응을 보인 3,7,8 번 균은 비 병원성이며 기회감염성인 Escherichia coli, Klebsiella pneumonia, Enterobacter aerogenes균임을 알 수 있고
음성 반응을 보인 6,7 번은 병원성을 가진 Proteus vulgaris, Salmonella typhymurium 임을 알 수 있다.
2. TSI시험
1)원리
KIA는 TSI와 달리 포도당과 젖당을 함유하고 있으며
TSI의 원리와 비슷하고 배지의 사면과 고층의 변화을 확인하여 세균을 비교 분석할 수 있다. TSI agar 내의 Sodium thlosulfate (Na2S2O2,티오 황산 나트륨)을 이용하여 H2S생성 배지내의 철과 결합하여 검은 색 침점이 나타난다.
가스 생성 균은 Co2와 H2를 생성시켜 배지가 갈라지는 현상이 일어난다.
2) 실험 과정
준비된 세균 3,6,7,8,9 세균들을 백금이 법을 이용하여 옮긴다.
이번 실험에서 2번 균은 그람 양성균인 Bacillus subtillis로 비교하기 위해 같이 실험한다. 또한 실험의 기준이 될 대조 균을 따로 준비하여 같이 넣는다.
라벨링은 실험에서 가장 중요한 부분이므로 주의를 기울려 기입한다.
3)결과
9,8,7,6,3,2, 대조균 순서로 정렬 되어있음
2번(K/A)-Bacillus subtilis, 3번(A/AGas)-젖당발효균, 6번(A/AGas H2S)-Proteus vulgaris
7번(A/AGas)-젖당발효균, 8번(A/AGas)-젖당발효균, 9번(K/AGas H2S)-Salmonella 으로 판명된다. 대조군은 아무런 반응 없이 K/K 반응을 보인다.
(참고) 실험관 관찰법
장내 세균 과인 6,9번은 H2S를 생성하는 것을 알 수 있고 세균의 성장인 것을 알 수 있다.
3. API kit
1)원리
API kit는 미생물을 종 단위까지 동정할 수 있는 kit이다.
API 20E 를 사용 하였으며 그람 음성 간균 중 장내세균의 동정에 사용된다.
다음사진은 kit 가 의미하는 이름들이다.
2)방법
1. 약5ml의 증류수를 tray에 부어서 수분 유지한다. (건조 방지)
2. suspension medium의 앰플을 열고 하나의 콜로니를 취한후 부유시킨다.
(1멕파렌드)
3. CIT,VP,GEL은 큐플까지 가득 채운다. 나머지는 튜브 까지만 채운다 (큐플제외)
ADH, LDC, ODC, H2S,URE는 mineral oil로 큐플 채움
4. 스트립 위에 뚜껑열고 36도에서 18~24시간 동안 배양한다.
5. 24시간 배양 후 몇 개의 test에 시약 첨가 후 판독
예) VP: 알파 naphthol 과 40% KOH를 각각 한 방울 첨가
IND: Kovac시약을 한 방울 첨가
6. 판독 표를 이용하여 판독
TDA: 철 플로라이드 반응시 갈색 (양성)
IND: 코백 시약 (제임스 시약) 주황빛
VP: VP1, VP2 시약을 넣고 10분뒤관찰. 처음: 연한 핑크 10분뒤: 찐한 핑크색
시약과 트레이
3) 결과
3번균 관찰
Escherichia coil 1 임을 알 수 있다.
6번균 관찰 시
Proteus vulgaris group 임을 알 수 있다.
7번 관찰 시
Klebsiella pneumonia 균임을 알 수 있다.
8번 관찰 시
Enterobacter aerogenes 임을 관찰 할 수 있다.
9번균을 관찰시는 다음과 같다
Salmonella spp임을 알 수 있으며 혈청학적 확인이 필요하다.
4. E- test(vancomtcin)
실시 방법
1) 균액을 Mcfarland no5에 탁도를 맞춤
2) Mueller-hinton 한천 배지 위에 골고루 바름
3) 항균제 plastic strip을 배지 위에 올림
4) 18~20시간 배양 후 타원형의 균발육 저지대가 plastic strip을 교차하는 지점의 농도 = MIC값 (MIC= 최소 성장 억제 농도)
5) 결과
아리우스 그람양성균
Enterobacter aerogenes
5. (해석)
Enterobacter aerogenes 균의 결과가 1.0으로 나타난 이유는 저렇게 나타난 이유는 스트레팅 동정시 제대로 하지 않아서 결과가 잘못 나왔다.
3번 8번균은 e-test용지에 뭍은 항생제(반코마이신)에 내성이 있기 때문에 아무 변화가 없었다. 결과가 나타나는 이유는 균에 따라 잘 작용하는 항생제 농도가 있기 때문인것 같다. 결과는 1번과 2번균은 그람 양성균이고 3번균은 그람 음성균이다.